HAT培养基如何筛选杂交瘤细胞？HGPRT机制解析

HAT筛选原理｜杂交瘤细胞为什么能在HAT培养基中活下来

摘要：HAT筛选利用嘌呤与嘧啶的补救合成途径，把杂交瘤细胞从骨髓瘤细胞和未融合脾细胞中区分出来。本文讲清其中的酶学逻辑。

关键词：HAT筛选、HAT培养基、杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞、脾细胞、单克隆抗体、杂交瘤细胞培养、次黄嘌呤

HAT培养基含次黄嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）、胸腺嘧啶（T）。三个字母对应两套DNA合成途径。

正常细胞有两条路：从头合成，以及利用现成碱基的补救合成。氨基蝶呤抑制二氢叶酸还原酶，从头合成被切断，细胞只能依赖补救途径，而补救途径需要HGPRT与胸腺嘧啶激酶。

骨髓瘤细胞（NS-1、SP2/0）是HGPRT缺陷株，补救途径不通，在HAT中死亡。未融合的脾细胞虽有HGPRT，但在体外不能长期增殖，逐渐消失。杂交瘤细胞从脾细胞继承了HGPRT，从骨髓瘤细胞继承了无限增殖能力，成为能存活并扩增的那一类细胞。

筛选期细胞同时承受代谢压力与低密度接种，这也是集落形成率容易偏低的原因。

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图1 HAT筛选的原理：从头合成途径与补救合成途径