杂交瘤单克隆化集落少？有限稀释培养条件对比|Hybriboost

单克隆抗体有限稀释法｜单细胞克隆成功率怎么提高

摘要：有限稀释法是单克隆抗体细胞株纯化的常规手段，但单细胞起始增殖能力弱，成功率常偏低。本文说明操作要点与提升思路。

关键词：单克隆抗体、有限稀释法、单细胞克隆、杂交瘤细胞、集落形成率、杂交瘤细胞培养基、细胞生长补剂、Hybriboost

有限稀释法的目标是让每个孔里只落一个细胞。按泊松分布，稀释到每孔约0.5–1个细胞时，仍有相当比例的孔为空或含两个以上细胞，铺板后需要在镜下确认。

难点在铺板之后。单个杂交瘤细胞在低密度条件下缺少旁分泌信号，起始增殖慢，很多孔迟迟不长出集落。常规FCS培养基中，长出集落的孔多在45%以下；加饲养层细胞可提高到34%–78%。

一项对比实验中，在培养基里加入Hybriboost促杂交瘤细胞生长剂，NS-1体系出现集落的孔占比约90%–96%，SP2/0约66%–89%。

需要提醒的是，这个指标统计的是出现集落的孔所占比例，并不等于阳性克隆率，阳性与否仍要靠ELISA等抗体检测确认。

上海曼博生物可提供Hybriboost促杂交瘤细胞生长剂及单克隆化阶段的技术支持（点击查看）。该产品仅面向科研用途，不得用于人体临床诊断或治疗。

图1 三种培养基中杂交瘤的单克隆化成功率（4次独立实验；数据来自研发方验证实验）