杂交瘤细胞培养入门：细胞融合、HAT筛选与单克隆化流程及培养基要点

摘要：杂交瘤细胞培养分为融合、HAT筛选、单克隆化三个阶段，各阶段对培养基的要求并不相同。本文梳理每一步的要点与常见问题。

关键词：杂交瘤细胞、杂交瘤细胞培养、HAT筛选、单克隆抗体、单克隆化、杂交瘤细胞融合、杂交瘤细胞培养基、集落形成率

杂交瘤细胞培养的目标，是让融合后的细胞在筛选压力下活下来，并长成来源单一的克隆。整个过程大致分三步。

1、先是融合。免疫小鼠的脾细胞与NS-1、SP2/0等骨髓瘤细胞在PEG或电融合条件下合并，形成杂交瘤细胞。

2、接下来是HAT筛选。HAT培养基中的氨基蝶呤阻断DNA从头合成途径，骨髓瘤细胞缺少HGPRT，无法走补救途径，因而死亡；未融合的脾细胞不能长期增殖，也会消失。只有杂交瘤细胞能存活。

3、之后是单克隆化。用有限稀释法或单细胞分选，把细胞稀释到接近每孔一个细胞，再等待集落形成。

三个阶段对培养基的要求并不相同：筛选期要抗压，单克隆化期要支持单细胞起始增殖。集落形成率偏低，问题往往就出在这两步。

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