原代肝细胞分离方法与胶原酶选择指南【Nordmark】

在生命科学研究和药物开发领域，高质量的原代肝细胞是研究肝脏生理功能、药物代谢和毒性评估的重要工具。体外培养肝细胞的核心挑战在于如何获得形态结构完整且保持高代谢活性的肝细胞。而胶原酶作为从肝脏组织中分离原代细胞的关键酶制剂，其选择直接影响细胞的产量、活性和功能完整性。

一、原代肝细胞分离的应用意义

原代肝细胞保留了体内肝脏的大部分特性，能够准确反映药物代谢、毒性反应和疾病机制，因此在以下领域具有不可替代的价值：

•  药物代谢和毒性研究

•  肝病发病机制研究

•  生物人工肝支持系统开发

•  肝细胞移植治疗

•  肝脏再生医学研究

二、不同肝细胞分离方法的比较

以下小编简要汇总了部分常用的肝脏细胞提取的方法，并对以下方法的优势和不足之处进行对比。

以下以大鼠肝脏为例向大家简要介绍肝脏细胞提取流程及选择合适的胶原酶产品。一般情况下采用胶原酶灌注法来分离大鼠肝细胞。简要步骤如下：

1、提前对灌洗液进行预热；

2、将小鼠麻醉，打开腹腔、暴露肝脏，包括门静脉（PV）和下腔静脉（IVC）；

3、在PV和IVC下方放置外科线，穿刺PV后结扎固定；

4、往PV内以4ml/min注入Hanks液(小鼠为例)后剪断IVC，期间可夹闭或打开IVC有助于血液排除；

5、至少灌洗5min，直至肝脏变色；

6、往PV内输注Hanks液+胶原酶（推荐使用Nordmark Collagenase NB7D/NB8）混合液以4ml/min的速度持续消化(以大鼠为例，动物体型越大，流速越快、胶原蛋白酶浓度越高)；

7、完成消化后去除胆囊和肝包膜，将肝脏实质部分放置在容器中并用2~8℃预冷的Hanks液浸泡，转移至生物安全柜进行后续处理。

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•  高特异性：优化胶原酶与辅酶比例，更大化肝细胞收获率

•  严格质控：每批次提供详细的活性检测报告，确保实验可重复性

•  低内毒素：减少对细胞的非特异性刺激

•  稳定供应：完善的生产体系保障产品批次间一致性

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